Tratamiento de la enfermedad renal diabética: situación actual y futura

 

Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Chat gpt. Autoría propia

Tema del artículo: El artículo trata sobre el tratamiento de la enfermedad renal diabética (ERD), una complicación mayor de la diabetes que puede conducir a la insuficiencia renal terminal. El enfoque está en las terapias actuales y futuras para tratar esta afección.

Mecanismo epigenómico tratado:

• Metilación del ADN: Se menciona cómo la metilación aberrante del ADN en las células mesangiales puede estar implicada en la progresión de la nefropatía diabética. Por ejemplo, se observa hipometilación en la región promotora del gen TXNIP en pacientes con ERD, lo que puede llevar a un aumento en la expresión del gen y a un daño renal avanzado.

• Modificaciones de histonas: El artículo describe cómo las modificaciones de histonas, como la acetilación y la metilación, están asociadas con la progresión de la ERD. Por ejemplo, se observa un aumento en la acetilación de H3K9 en células mesangiales bajo condiciones hiperglucémicas, lo que está relacionado con la activación de la vía inflamatoria de NF-κB.

• ncRNA: Se menciona el papel de los ARN no codificantes, como los microARNs (miRNA), en la regulación de la fibrosis renal. Por ejemplo, miRNA-21, que está altamente expresado en el riñón, está relacionado con la señalización de TGF-β, una vía clave en la fibrosis renal.

Cómo se lo hizo:

El estudio analiza diferentes enfoques para manipular estos mecanismos epigenéticos:

• Inhibidores de Histonas: Se utilizaron inhibidores de desacetilasa de histonas como vorinostat, valproato, sodio butirato y trichostatin en modelos de ratas para evaluar su impacto en la reducción de la fibrosis renal y la mejora de la función renal .

• Dznep: Este es un inhibidor de Ezh2 (H3K27 metiltransferasa) que se utilizó para investigar su efecto en la fibrosis renal en modelos de ratones con daño renal agudo y transición a crónico. Se observó que Dznep podía regular epigenéticamente la expresión de genes profibróticos como TIMP2 .

• Modelos Animales: Se realizaron experimentos en modelos de ratas y ratones para estudiar los efectos de los epifármacos en la progresión de la enfermedad renal, permitiendo la observación de cambios en la expresión génica y en la fibrosis renal.

Resultados:

• Reducción de proteinuria: Los inhibidores de la deacetilasa de histonas han mostrado eficacia en la reducción de la proteinuria, un marcador importante de daño renal, en modelos de roedores con nefropatía diabética.

• Mejora del daño oxidativo y la fibrosis: Estos inhibidores también han demostrado ser eficaces en la reducción del estrés oxidativo y la fibrosis renal, que son contribuyentes clave al deterioro de la función renal en ERD.

No tenemos resultados a mediano o largo plazo puesto que es un articulo del año 2021.

Figura 2:La evolución temporal de los tratamientos actuales. BENEDICT, Bergamo Nephrologic Diabetes Complications Trial; IRMA-2, Irbesartan in Patients with Type 2 Diabetes and Microalbuminuria Study; MARVAL, Microalbuminuria reduction with valsartan; INNOVATION, Incident to manifest: angiotensin II receptor blocker, Telmisartan, Investigation On type II diabetic nephopathy; RENAAL, Reduction of Endpoints in NIDDM with the Antagonist Angiotensin II Antagonist Losartan; IDNT, Irbesartan in Diabetic Nephopathy Trial; ROADMAP, Olmesartan and Diabetes Microalbuminuria Prevention; J-DOIT3, Japan Diabetes Optimal Integrated Treatment study for 3 major risk factors of cardiovascular disease; CREDENCE, Canagliflozin and Renal Events in Diabetes with Established Nephropathy Clinical Evaluation; RAS, sistema renina-angiotensina; SGLT2, cotransportador de sodio-glucosa 2. Recuperado de: https://doi.org/10.4093/dmj.2020.0217

Referencia bibliográfica:

1. Yamazaki T, Mimura I, Tanaka T, Nangaku M. Treatment of diabetic kidney disease: Current and future. Diabetes Metab J [Internet]. 2021 [citado el 31 de agosto de 2024];45(1):11–26. Disponible en: http://dx.doi.org/10.4093/dmj.2020.0217

CRISPR/Cas9 para el tratamiento del cáncer: tecnología, aplicaciones clínicas y desafíos

 

Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Chat gpt. Autoría propia

Tipo de Edición:

In vivo o ex vivo: La tecnología CRISPR/Cas9 se aplica tanto en ex vivo, donde las células son modificadas fuera del cuerpo y luego reintegradas, como en in vivo, donde la edición se realiza directamente en el organismo.

Somática o germinal: Principalmente se utiliza en edición somática, enfocándose en modificar células no germinales para tratar enfermedades sin afectar la línea germinal.

Dirigido hacia:

Se dirige principalmente a células cancerosas, pero también se utiliza para modificar células del sistema inmunológico, como las células T, para mejorar su capacidad de reconocer y atacar tumores. Además, se puede dirigir a virus carcinogénicos que contribuyen al desarrollo del cáncer

Dirigido por:

La tecnología CRISPR/Cas9 utiliza un ARN guía (gRNA) que se empareja con la secuencia diana en el ADN, dirigiendo la nucleasa Cas9 al sitio específico del ADN que se desea editar, permitiendo la inducción de cortes de doble cadena.

Órgano a tratar:

CRISPR/Cas9 se ha utilizado en el tratamiento de varios tipos de cáncer, incluyendo células de leucemia, tumores sólidos en órganos como el hígado, pulmón y páncreas, así como en cáncer de vejiga.

Vía de administración:

La vía de administración puede incluir inyecciones directas en el caso de la edición in vivo, o transfusiones de células modificadas en el caso de la edición ex vivo, donde las células T son modificadas y luego reintegradas al paciente.

Resultados a corto plazo:

A corto plazo, se espera observar reducción en la proliferación de células tumorales, mejoras en la respuesta inmune y disminución del tamaño del tumor en modelos preclínicos y ensayos clínicos iniciales.

Resultados a mediano plazo:

A mediano plazo, se anticipa que los pacientes experimenten mejoras en la supervivencia, reducción de recaídas y el desarrollo de terapias personalizadas basadas en la edición genética de células tumorales.

Resultados a largo plazo:

A largo plazo, los resultados podrían incluir la cura de ciertos tipos de cáncer, la prevención de la progresión de la enfermedad y el desarrollo de tratamientos más seguros y efectivos con menos efectos secundarios, así como la posibilidad de nuevas terapias basadas en la tecnología CRISPR/Cas9.

Figura 2: Aplicaciones de CRISPR/Cas9 en estudios sobre el tratamiento del cáncer de pulmón. Los estudios incluyen oncogenes específicos, genes supresores de tumores, genes de resistencia a fármacos y genes relacionados con el sistema inmunitario tumoral. Recuperado de: https://doi.org/10.1016/j.molmed.2019.07.007

Referencia bibliográfica: 

1. Cheng X, Fan S, Wen C, Du X. CRISPR/Cas9 for cancer treatment: technology, clinical applications and challenges. Brief Funct Genomics [Internet]. 2020 [citado el 24 de agosto de 2024];19(3):209–14. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1093/bfgp/elaa001

Stem Cell Therapy for Spinal Cord Injury

 

 Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Chat gpt. Autoría propia

1. Tipo de Stem Cell:

Células madre mesenquimales derivadas de médula ósea (BM-MSCs)

Células madre mesenquimales derivadas de cordón umbilical (U-MSCs)

Células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo (AD-MSCs)

Células madre neurales (NSCs)

Células progenitoras neurales (NPCs)

Células madre embrionarias (ESCs)

Células madre pluripotentes inducidas (iPSCs)

Vesículas extracelulares derivadas de células madre (EVs) (1).

2. Método de obtención:

BM-MSCs: Se obtienen de la médula ósea de adultos.

U-MSCs: Se obtienen de cordones umbilicales humanos.

AD-MSCs: Se obtienen del tejido adiposo.

NSCs y NPCs: Se obtienen a partir de tejidos neurales.

ESCs: Se obtienen a partir de embriones.

iPSCs: Se generan mediante reprogramación genética de células somáticas adultas (1).

3. Vía de administración:

Las células madre pueden ser administradas por varias vías dependiendo del tipo de célula y el estudio específico. Estas incluyen inyecciones intradurales, intravenosas, y en algunos casos, administración directa al sitio de la lesión (1).

4. Resultados a corto, mediano y largo plazo:

Resultados a Corto Plazo:

• Protección Neuronal: Las células madre protegen las neuronas del daño adicional al secretar factores que promueven su supervivencia y crecimiento.
• Reducción de la Inflamación: Las células madre, especialmente las mesenquimales, reducen la inflamación en la lesión, minimizando el daño secundario.
• Disminución de Cicatrices Gliales: Al reducir la formación de cicatrices, se facilita la regeneración de los axones dañados.

Resultados a Mediano Plazo:

• Recuperación Funcional: En 3 a 6 meses, algunos pacientes muestran mejoras motoras y sensoriales, gracias a la diferenciación de las células madre en neuronas y otros tipos celulares.
• Plasticidad Neuronal: Las células madre promueven la reorganización neuronal, crucial para la rehabilitación.
• Soporte Nutricional: Secretan factores que apoyan la reparación y mejora funcional del tejido nervioso.

Resultados a Largo Plazo:

• Recuperación Limitada: Aunque hay mejoras, la restauración completa de la función neurológica sigue siendo difícil.
• Terapias Combinadas: La combinación de células madre con otras terapias podría mejorar los resultados a largo plazo.
• Seguridad: Es esencial monitorear la seguridad y persistencia de las células madre para evitar efectos adversos como tumores (1).

Figura 2:A: después de una lesión, un traumatismo y una rotura de vasos sanguíneos se produce isquemia, anoxia e inflamación. Este entorno conducea la muerte y degeneración neuronal; B: la infusión de MSC se puede realizar en diferentes lugares. Todavía hay desacuerdo sobre la cantidad de células e infusiones, pero se pueden utilizar MSC de diferentes fuentes para el tratamiento (cordón umbilical, tejido adiposo y médula ósea); C: después de la infusión, las MSC cambian el entorno lesionado liberando citocinas antiinflamatorias (TNF-β1, IL-13, IL-18, CNTF, NT-3 eIL-10), neuroprotectoras (BDNF, GDNF, NGF, NT-1, NT-3, CNTF y bFGF) y angiogénicas (TIMP-1, VEGF, HGF, PDGF, IL-6 eIL-8). También se puede observar supervivencia celular, remielinización y reparación vascular. MSC: células estromales mesenquimales; TNF-β1: factor de crecimiento transformante β1; IL-13: interleucina 13; IL-18: interleucina 18; CNTF: factor neurotrófico ciliar; IL-10: interleucina 10; BDNF: factor neurotrófico derivado del cerebro; GDNF: factor neurotrófico derivado de células gliales; NGF: factor de crecimiento nervioso; NT-1: neurotrofina 1; NT-3: neurotrofina 3; bFGF: factor de crecimiento básico de fibroblastos; TIMP-1: inhibidor tisular de la metaloproteinasa-1; VEGF: factor de crecimiento endotelial vascular; HGF: factor de crecimiento de hepatocitos; PDGF: factor de crecimiento derivado de plaquetas; IL-6: interleucina 6; IL-8: interleucina 8. Recuperado de: http://dx.doi.org/10.20517/2347-8659.2019.009

Referencia bibliográfica: 

1. Huang L, Fu C, Xiong F, He C, Wei Q. Stem cell therapy for spinal cord injury. Cell Transplant [Internet]. 2021 [citado el 18 de agosto de 2024];30:096368972198926. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1177/0963689721989266

Comparación de modelos de ratones transgénicos y de adenovirus hACE2 para la infección por SARS-CoV-2

Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Gemini. Autoría propia

Tipo de Animal: Ratones transgénicos K18-hACE2.

Método de Obtención:

K18-hACE2 Transgenic Mice: Estos ratones se obtienen mediante la microinyección de ADN en cigotos. Se inserta el gen humano ACE2 bajo el control del promotor de la citoqueratina 18 (K18) en el ADN de los cigotos de ratón. Los embriones modificados se implantan en hembras receptoras, resultando en ratones transgénicos que expresan hACE2 en sus tejidos epiteliales. Este modelo es particularmente valioso para estudiar la patogénesis de SARS-CoV-2 y evaluar la eficacia de vacunas y tratamientos antivirales.

Adenovirus-Mediated Delivery System: En este método, se utiliza la transducción viral para introducir el gen hACE2 en los ratones. Se produce un vector adenoviral que lleva el gen hACE2, y se administra mediante instilación intranasal, lo que permite la expresión temporal del receptor en las células del epitelio respiratorio. Este sistema es flexible y se puede aplicar a múltiples fondos genéticos de ratones, siendo útil para estudiar la infección pulmonar sin causar una enfermedad sistémica severa.

Función:

Modelo transgénico K18-hACE2: Este modelo se utiliza para probar vacunas y antivirales debido a su capacidad para replicar el SARS-CoV-2 a altos títulos en los cornetes nasales, pulmones y cerebro, con alta letalidad y producción de citoquinas/quimiocinas. Proporciona un modelo riguroso para estudios iniciales.

Sistema de entrega mediada por adenovirus: Este método resulta en la replicación viral a títulos más bajos limitados a los cornetes nasales y los pulmones y no muestra signos clínicos de infección. Ofrece flexibilidad para su uso en múltiples antecedentes genéticos y cepas de ratones modificados, y es adecuado para estudios que se centran en la infección pulmonar sin enfermedad sistémica severa (1).

Figura 2: Infección por SARS-CoV-2 con B6-K18-hACE2. Los ratones B6 K1 8-hACE2 se infectaron con 1×104 PFU de SARS-CoV-2 y se monitorearon para determinar la pérdida de peso (A) y los títulos virales (B y C) de acuerdo con la línea de tiempo indicada. n = número de animales en el día 0, a medida que los animales se recolectaban para los títulos, n se redujo de acuerdo con el diagrama. Recuperado de:http://dx.doi.org/10.1080/22221751.2020.1838955

Ventajas de los transgénicos

1. Incremento de la producción agrícola y ganadera: Las cosechas pueden ser resistentes a plagas y condiciones climatológicas adversas, lo que resulta en una mayor multiplicación de cosechas y un incremento notable de productos alimenticios.

2. Producción de medicamentos y productos médicos: Se pueden generar medicamentos como hormonas de crecimiento humano, insulina e interferón, así como productos de interés comercial y farmacéutico a gran escala y a precios reducidos.

3. Biorremediación: Los organismos transgénicos pueden degradar eficientemente compuestos tóxicos y contaminantes, como el petróleo y el tolueno, lo que beneficia al medio ambiente.

4. Xenotrasplantes: Los transgénicos permiten la posibilidad de trasplantes entre especies diferentes, como órganos de animales modificados genéticamente para ser compatibles con el cuerpo humano.

5. Mejora de la calidad nutritiva de los alimentos: Los transgénicos pueden ser diseñados para aumentar el contenido nutricional de los alimentos, proporcionando vitaminas y minerales adicionales, lo cual es beneficioso para combatir deficiencias nutricionales en poblaciones vulnerables​ (2).

Desventajas de los transgénicos

1. Riesgos para la salud: La manipulación genética puede afectar la salud humana, causando posibles efectos adversos a largo plazo que aún no se comprenden completamente.

2. Impacto ambiental: Los transgénicos pueden afectar negativamente al medio ambiente, incluyendo la flora y la biodiversidad, y podrían causar la desaparición de especies a través de la polinización cruzada.

3. Dependencia económica: Existe el riesgo de que los agricultores se vuelvan económicamente dependientes de las grandes empresas que comercializan semillas y productos transgénicos, afectando la economía local y la soberanía alimentaria.

4. Preocupaciones ecológicas: La introducción de transgénicos en la naturaleza puede causar un caos ecológico si ciertos genes se extienden sin control, como el gen Bt, que podría llevar a la desaparición de insectos esenciales para el ecosistema.

5. Controversias éticas y sociales: La sociedad a menudo ve los transgénicos como antinaturales y peligrosos, lo que genera resistencia y debate sobre su uso y aceptación (2).

Referencias bibliográficas:

1. Rathnasinghe R, Strohmeier S, Amanat F, Gillespie VL, Krammer F, García-Sastre A, et al. Comparison of transgenic and adenovirus hACE2 mouse models for SARS-CoV-2 infection. Emerg Microbes Infect [Internet]. 2020 [citado el 28 de julio de 2024];9(1):2433–45. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1080/22221751.2020.1838955

2. O´Farril L, Caridad L. Transgénesis: una aproximación a sus riesgos y beneficios. Acta méd centro [Internet]. 2021 [citado el 28 de julio de 2024];15(1):141–55. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid

ADN recombinante

ADN DE RECOMBINACIÓN NATURAL

Tras la pista de los replicadores: la transferencia de genes en la naturaleza

En el fascinante mundo del sexo bacteriano, la conjugación permite la transferencia horizontal de genes de una célula donadora a una receptora a través de plásmidos, mientras que la transformación implica que una bacteria adquiera segmentos de ADN de bacterias lisadas. Por otro lado, la transducción facilita la transferencia de material genético entre bacterias mediante la intervención de virus como mensajeros genéticos. Estos mecanismos ilustran la increíble versatilidad de las bacterias en intercambiar información genética y adaptarse a su entorno de manera sorprendente (1).

Figura 1: La conjugación bacteriana permite la transferencia de material genético entrebacterias por contacto directo, mediante puentes de unión y conexión entre las dos células. Recuperado de: https://www.researchgate.

                                                ADN DE RECOMBINACIÓN ARTIFICIAL

CLONACIÓN, EXPRESIÓN Y SEROREACTIVIDAD DE LA PROTEÍNA DE CONJUNTO DE LIPOPOLISACÁRIDO RECOMBINANTE – D (LPTD) DE Bartonella bacilliformis

T: Clonación, expresión y purificación de la proteína LptD recombinante de Bartonella bacilliformis.

O: Evaluar la serorreactividad de la proteína LptD recombinante para su potencial uso en el desarrollo de vacunas contra la Bartonella bacilliformis.

G: El dominio extracelular de la proteína LptD (dex_lptD) de Bartonella bacilliformis.

ER: NcoI y XhoI.

EL: T4 ligasa.

V: pET28a(+).

CR: Escherichia coli TOP10 (cepa de clonación) y Escherichia coli BL21 (DE3)pLysS (cepa de expresión).

MTG: Transformación por el método de cloruro de calcio:El método de cloruro de calcio es una técnica para introducir ADN en células bacterianas, como E. coli. Se trata de incubar las células en una solución de cloruro de calcio y luego aplicar un choque térmico para facilitar la absorción del ADN.

MIC: El cultivo de las cepas de E. coli transformadas se realizó en placas de agar, donde se seleccionaron colonias que presentaban el plásmido pET28a(+) - dex_lptD. Se obtuvieron un total de 116 colonias en la placa de ligado, lo que indica una alta tasa de transformación.

Para identificar los clones que contenían el gen dex_lptD, se utilizó la técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) en colonias seleccionadas al azar. Esta técnica permitió amplificar el gen de interés y confirmar su presencia en las colonias transformadas.

Los productos de amplificación obtenidos a través de la PCR confirmaron la presencia del gen dex_lptD en las colonias seleccionadas. Esto permitió proceder con la secuenciación del gen para verificar su integridad y asegurar que no hubiera cambios nucleotídicos respecto al molde original. Posteriormente, se utilizó esta información para realizar la transformación en la cepa de expresión E. coli BL21(DE3)pLysS, donde también se confirmó la correcta transformación mediante PCR. 

Figura 2: Modelo 3D del dominio de ensamblaje de lipopolisacáridos extracelulares recombinantes - D de Bartonella bacilliformis (dexr_LptD). Recuperado de: https://doi.org/10.17843/rpmesp.2022.391.9292

Referencias bibliográficas:  

1.Baas F, Castro L, Cuevas A. Tras la pista de los replicadores: la transferencia de genes en la naturaleza. CICY.mx [Internet]. México: Rodrigo Duno y Lila Lorena, 2018 [citado el 19 de julio de 2024]. Disponible en: https://www.cicy.mx

2. Flores-Nuñez A, Ventura G, Bailon H, Marcelo A, Sandoval G, Padilla-Rojas C. Clonamiento, expresión y seroreactividad de la proteína recombinante de ensamblaje de lipopolisacáridos – D (LptD) de Bartonella bacilliformis. Rev Peru Med Exp Salud Publica [Internet]. 2022 [citado el 19 de julio de 2024];39(1):15–23. Disponible en: http://dx.doi.org/10.17843/rpmesp.2022.391.9292

Hibridación fluorescente in situ (FISH): una herramienta de diagnóstico útil para el melanoma conjuntival infantil

 

 Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Gemini. Autoría propia

El artículo nos habla de la hibridación fluorescente in situ (FISH) para el diagnóstico el melanoma conjuntival (CjM), en donde se detecta las alteraciones en el número de copias en los genes CCND1 (11q13) y RREB1 (6p25). El análisis de la FISH reveló un alto porcentaje de células tumorales con ganancias en estos genes, lo que ayuda al diagnóstico preciso del melanoma conjuntival. Esta técnica proporciona información valiosa sobre el panorama genético de CjM, además muestra similitudes con el melanoma cutáneo y sugiere un papel potencial de la luz ultravioleta en la tumorigénesis (1).

Figura 2:  CjM epitelioide invasivo: (a) aumentos de bajo y (b) alto aumento de la tinción con hematoxilina y eosina que muestran una proliferación melanocítica epitelioide atípica con una mitosis atípica en el componente dérmico invasivo. (c) Inmunotinción con Melan A que muestra una distribución desordenada de melanocitos atípicos discohesivos, (d) Inmunotinción con Sox-10 que muestra núcleos pleomórficos positivos, (e) Pérdida difusa de la inmunotinción de p16 en células tumorales, (f) La inmunotinción con ciclina nuclear D1 está presente en la mayoría células tumorales invasivas, (g) aumento bajo y (h) alto de la prueba positiva de FISH que muestra un mayor número de señales verdes (CCND1) y rojas (RREB1) en un porcentaje significativo, por encima del límite aceptado, de células tumorales ( A, X40; B-F, X400; G, X600; H, X1000). Recuperado de: http://dx.doi.org/10.1177/11206721211030775

Referencia bibliográfica:  

1. María Moral R, Monteagudo C, Muriel J, Moreno L, María Peiró A. Fluorescent in situ hybridization (FISH): A useful diagnostic tool for childhood conjunctival melanoma. Eur J Ophthalmol [Internet]. 2022;[citado el 23 de junio de 2024].32(6):NP13–9. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1177/11206721211030775

 

Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores

 

 Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Gemini. Autoría propia.

Tema: Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores.

Objetivo: Conocer la prevalencia de infección por Citomegalovirus con la identificación del genoma viral del Citomegalovirus mediante la Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR) en lactantes de 0 a 12 meses con sospecha de infección congénita.

Materiales y métodos:El estudio fue observacional, descriptivo, transversal y retrospectivo, realizado entre enero de 2015 y mayo de 2017 en centros de salud de Asunción y Departamento Central. Se incluyeron lactantes de 0 a 12 meses con sospecha de infección por CMV, excluyendo muestras deficientes. Se recopilaron datos de edad, procedencia, signos y síntomas, y resultados de PCR para CMV en una hoja de captación de datos. Las muestras sanguíneas con EDTA se enviaron a un laboratorio de virología para la extracción de ADN con el kit Promega® y la realización de PCR en tiempo real siguiendo un protocolo modificado.

Tipo de muestra biológica: Sangre con EDTA.

Tipo de ácido nucleico: ADN viral.

Pasos:

1.Recepción de muestras:Las muestras de sangre con EDTA y los datos asociados se reciben en el laboratorio de virología.

2.Extracción de ADN:Se extrae el ADN viral de las muestras utilizando el kit comercial Promega® siguiendo las instrucciones del fabricante.

3. Preparación de la PCR:Se prepara la mezcla de reacción de PCR con la Master mix Sso Fast Eva Green Supermix de Bio Rad®.

4. PCR en tiempo real:Se realiza la PCR en el equipo Rotor Gene® siguiendo el protocolo modificado de Casas y Tenorio para la detección del gen UL54.

5. Análisis de resultados:Se analizan los resultados de la PCR, con un límite de detección de 5 copias/ml y utilizando controles positivos y negativos de Artus®.

6. Interpretación de resultados: Los resultados se informan como Detectables o No detectables, con una sensibilidad del 100% y una especificidad del 78%.

7. Documentación y análisis: Se documentan los resultados y se realiza un análisis estadístico utilizando el software Epi Info.7® para presentar los datos de manera descriptiva y analítica.

Extracción: La extracción del ADN se realizó con el Kit comercial Promega, acorde a las instrucciones del fabricante seguido de una PCR en tiempo real en equipo Rotor Gene, para el volumen final se utilizó una Master mix Sso Fast Eva Green Supermix de Bio Rad.

Genes a analizar y tamaño en pb: Gen UL54 (78 pb).

Tipo de PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en tiempo real.

Número de copias - límite de detención: 5 copias/ml.

Visualización: No hay visualización, pero la sensibilidad y valor predictivo negativo de la prueba es de 100%, la especificidad de 78%.

                                 Figura 2: Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Recuperado de:https://repositorio-uapa.

Referencia bibliográfica:  

1. Portillo C, Samudio G, Ortiz L, Ramos P. Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores, Paraguay 2015-2017. Pediatr (Asunción) [Internet]. 2019;[citado el 15 de junio de 2024].46(1):26–32. Disponible en: http://dx.doi.org/10.31698/ped.46012019005