Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores

 

 Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Gemini. Autoría propia.

Tema: Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores.

Objetivo: Conocer la prevalencia de infección por Citomegalovirus con la identificación del genoma viral del Citomegalovirus mediante la Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR) en lactantes de 0 a 12 meses con sospecha de infección congénita.

Materiales y métodos:El estudio fue observacional, descriptivo, transversal y retrospectivo, realizado entre enero de 2015 y mayo de 2017 en centros de salud de Asunción y Departamento Central. Se incluyeron lactantes de 0 a 12 meses con sospecha de infección por CMV, excluyendo muestras deficientes. Se recopilaron datos de edad, procedencia, signos y síntomas, y resultados de PCR para CMV en una hoja de captación de datos. Las muestras sanguíneas con EDTA se enviaron a un laboratorio de virología para la extracción de ADN con el kit Promega® y la realización de PCR en tiempo real siguiendo un protocolo modificado.

Tipo de muestra biológica: Sangre con EDTA.

Tipo de ácido nucleico: ADN viral.

Pasos:

1.Recepción de muestras:Las muestras de sangre con EDTA y los datos asociados se reciben en el laboratorio de virología.

2.Extracción de ADN:Se extrae el ADN viral de las muestras utilizando el kit comercial Promega® siguiendo las instrucciones del fabricante.

3. Preparación de la PCR:Se prepara la mezcla de reacción de PCR con la Master mix Sso Fast Eva Green Supermix de Bio Rad®.

4. PCR en tiempo real:Se realiza la PCR en el equipo Rotor Gene® siguiendo el protocolo modificado de Casas y Tenorio para la detección del gen UL54.

5. Análisis de resultados:Se analizan los resultados de la PCR, con un límite de detección de 5 copias/ml y utilizando controles positivos y negativos de Artus®.

6. Interpretación de resultados: Los resultados se informan como Detectables o No detectables, con una sensibilidad del 100% y una especificidad del 78%.

7. Documentación y análisis: Se documentan los resultados y se realiza un análisis estadístico utilizando el software Epi Info.7® para presentar los datos de manera descriptiva y analítica.

Extracción: La extracción del ADN se realizó con el Kit comercial Promega, acorde a las instrucciones del fabricante seguido de una PCR en tiempo real en equipo Rotor Gene, para el volumen final se utilizó una Master mix Sso Fast Eva Green Supermix de Bio Rad.

Genes a analizar y tamaño en pb: Gen UL54 (78 pb).

Tipo de PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en tiempo real.

Número de copias - límite de detención: 5 copias/ml.

Visualización: No hay visualización, pero la sensibilidad y valor predictivo negativo de la prueba es de 100%, la especificidad de 78%.

                                 Figura 2: Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Recuperado de:https://repositorio-uapa.

Referencia bibliográfica:  

1. Portillo C, Samudio G, Ortiz L, Ramos P. Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores, Paraguay 2015-2017. Pediatr (Asunción) [Internet]. 2019;[citado el 15 de junio de 2024].46(1):26–32. Disponible en: http://dx.doi.org/10.31698/ped.46012019005