ADN recombinante

ADN DE RECOMBINACIÓN NATURAL

Tras la pista de los replicadores: la transferencia de genes en la naturaleza

En el fascinante mundo del sexo bacteriano, la conjugación permite la transferencia horizontal de genes de una célula donadora a una receptora a través de plásmidos, mientras que la transformación implica que una bacteria adquiera segmentos de ADN de bacterias lisadas. Por otro lado, la transducción facilita la transferencia de material genético entre bacterias mediante la intervención de virus como mensajeros genéticos. Estos mecanismos ilustran la increíble versatilidad de las bacterias en intercambiar información genética y adaptarse a su entorno de manera sorprendente (1).

Figura 1: La conjugación bacteriana permite la transferencia de material genético entrebacterias por contacto directo, mediante puentes de unión y conexión entre las dos células. Recuperado de: https://www.researchgate.

                                                ADN DE RECOMBINACIÓN ARTIFICIAL

CLONACIÓN, EXPRESIÓN Y SEROREACTIVIDAD DE LA PROTEÍNA DE CONJUNTO DE LIPOPOLISACÁRIDO RECOMBINANTE – D (LPTD) DE Bartonella bacilliformis

T: Clonación, expresión y purificación de la proteína LptD recombinante de Bartonella bacilliformis.

O: Evaluar la serorreactividad de la proteína LptD recombinante para su potencial uso en el desarrollo de vacunas contra la Bartonella bacilliformis.

G: El dominio extracelular de la proteína LptD (dex_lptD) de Bartonella bacilliformis.

ER: NcoI y XhoI.

EL: T4 ligasa.

V: pET28a(+).

CR: Escherichia coli TOP10 (cepa de clonación) y Escherichia coli BL21 (DE3)pLysS (cepa de expresión).

MTG: Transformación por el método de cloruro de calcio:El método de cloruro de calcio es una técnica para introducir ADN en células bacterianas, como E. coli. Se trata de incubar las células en una solución de cloruro de calcio y luego aplicar un choque térmico para facilitar la absorción del ADN.

MIC: El cultivo de las cepas de E. coli transformadas se realizó en placas de agar, donde se seleccionaron colonias que presentaban el plásmido pET28a(+) - dex_lptD. Se obtuvieron un total de 116 colonias en la placa de ligado, lo que indica una alta tasa de transformación.

Para identificar los clones que contenían el gen dex_lptD, se utilizó la técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) en colonias seleccionadas al azar. Esta técnica permitió amplificar el gen de interés y confirmar su presencia en las colonias transformadas.

Los productos de amplificación obtenidos a través de la PCR confirmaron la presencia del gen dex_lptD en las colonias seleccionadas. Esto permitió proceder con la secuenciación del gen para verificar su integridad y asegurar que no hubiera cambios nucleotídicos respecto al molde original. Posteriormente, se utilizó esta información para realizar la transformación en la cepa de expresión E. coli BL21(DE3)pLysS, donde también se confirmó la correcta transformación mediante PCR. 

Figura 2: Modelo 3D del dominio de ensamblaje de lipopolisacáridos extracelulares recombinantes - D de Bartonella bacilliformis (dexr_LptD). Recuperado de: https://doi.org/10.17843/rpmesp.2022.391.9292

Referencias bibliográficas:  

1.Baas F, Castro L, Cuevas A. Tras la pista de los replicadores: la transferencia de genes en la naturaleza. CICY.mx [Internet]. México: Rodrigo Duno y Lila Lorena, 2018 [citado el 19 de julio de 2024]. Disponible en: https://www.cicy.mx

2. Flores-Nuñez A, Ventura G, Bailon H, Marcelo A, Sandoval G, Padilla-Rojas C. Clonamiento, expresión y seroreactividad de la proteína recombinante de ensamblaje de lipopolisacáridos – D (LptD) de Bartonella bacilliformis. Rev Peru Med Exp Salud Publica [Internet]. 2022 [citado el 19 de julio de 2024];39(1):15–23. Disponible en: http://dx.doi.org/10.17843/rpmesp.2022.391.9292