Hibridación fluorescente in situ (FISH): una herramienta de diagnóstico útil para el melanoma conjuntival infantil

 

 Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Gemini. Autoría propia

El artículo nos habla de la hibridación fluorescente in situ (FISH) para el diagnóstico el melanoma conjuntival (CjM), en donde se detecta las alteraciones en el número de copias en los genes CCND1 (11q13) y RREB1 (6p25). El análisis de la FISH reveló un alto porcentaje de células tumorales con ganancias en estos genes, lo que ayuda al diagnóstico preciso del melanoma conjuntival. Esta técnica proporciona información valiosa sobre el panorama genético de CjM, además muestra similitudes con el melanoma cutáneo y sugiere un papel potencial de la luz ultravioleta en la tumorigénesis (1).

Figura 2:  CjM epitelioide invasivo: (a) aumentos de bajo y (b) alto aumento de la tinción con hematoxilina y eosina que muestran una proliferación melanocítica epitelioide atípica con una mitosis atípica en el componente dérmico invasivo. (c) Inmunotinción con Melan A que muestra una distribución desordenada de melanocitos atípicos discohesivos, (d) Inmunotinción con Sox-10 que muestra núcleos pleomórficos positivos, (e) Pérdida difusa de la inmunotinción de p16 en células tumorales, (f) La inmunotinción con ciclina nuclear D1 está presente en la mayoría células tumorales invasivas, (g) aumento bajo y (h) alto de la prueba positiva de FISH que muestra un mayor número de señales verdes (CCND1) y rojas (RREB1) en un porcentaje significativo, por encima del límite aceptado, de células tumorales ( A, X40; B-F, X400; G, X600; H, X1000). Recuperado de: http://dx.doi.org/10.1177/11206721211030775

Referencia bibliográfica:  

1. María Moral R, Monteagudo C, Muriel J, Moreno L, María Peiró A. Fluorescent in situ hybridization (FISH): A useful diagnostic tool for childhood conjunctival melanoma. Eur J Ophthalmol [Internet]. 2022;[citado el 23 de junio de 2024].32(6):NP13–9. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1177/11206721211030775

 

Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores

 

 Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Gemini. Autoría propia.

Tema: Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores.

Objetivo: Conocer la prevalencia de infección por Citomegalovirus con la identificación del genoma viral del Citomegalovirus mediante la Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR) en lactantes de 0 a 12 meses con sospecha de infección congénita.

Materiales y métodos:El estudio fue observacional, descriptivo, transversal y retrospectivo, realizado entre enero de 2015 y mayo de 2017 en centros de salud de Asunción y Departamento Central. Se incluyeron lactantes de 0 a 12 meses con sospecha de infección por CMV, excluyendo muestras deficientes. Se recopilaron datos de edad, procedencia, signos y síntomas, y resultados de PCR para CMV en una hoja de captación de datos. Las muestras sanguíneas con EDTA se enviaron a un laboratorio de virología para la extracción de ADN con el kit Promega® y la realización de PCR en tiempo real siguiendo un protocolo modificado.

Tipo de muestra biológica: Sangre con EDTA.

Tipo de ácido nucleico: ADN viral.

Pasos:

1.Recepción de muestras:Las muestras de sangre con EDTA y los datos asociados se reciben en el laboratorio de virología.

2.Extracción de ADN:Se extrae el ADN viral de las muestras utilizando el kit comercial Promega® siguiendo las instrucciones del fabricante.

3. Preparación de la PCR:Se prepara la mezcla de reacción de PCR con la Master mix Sso Fast Eva Green Supermix de Bio Rad®.

4. PCR en tiempo real:Se realiza la PCR en el equipo Rotor Gene® siguiendo el protocolo modificado de Casas y Tenorio para la detección del gen UL54.

5. Análisis de resultados:Se analizan los resultados de la PCR, con un límite de detección de 5 copias/ml y utilizando controles positivos y negativos de Artus®.

6. Interpretación de resultados: Los resultados se informan como Detectables o No detectables, con una sensibilidad del 100% y una especificidad del 78%.

7. Documentación y análisis: Se documentan los resultados y se realiza un análisis estadístico utilizando el software Epi Info.7® para presentar los datos de manera descriptiva y analítica.

Extracción: La extracción del ADN se realizó con el Kit comercial Promega, acorde a las instrucciones del fabricante seguido de una PCR en tiempo real en equipo Rotor Gene, para el volumen final se utilizó una Master mix Sso Fast Eva Green Supermix de Bio Rad.

Genes a analizar y tamaño en pb: Gen UL54 (78 pb).

Tipo de PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en tiempo real.

Número de copias - límite de detención: 5 copias/ml.

Visualización: No hay visualización, pero la sensibilidad y valor predictivo negativo de la prueba es de 100%, la especificidad de 78%.

                                 Figura 2: Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Recuperado de:https://repositorio-uapa.

Referencia bibliográfica:  

1. Portillo C, Samudio G, Ortiz L, Ramos P. Detección de Citomegalovirus por PCR en tiempo real en sangre de lactantes menores, Paraguay 2015-2017. Pediatr (Asunción) [Internet]. 2019;[citado el 15 de junio de 2024].46(1):26–32. Disponible en: http://dx.doi.org/10.31698/ped.46012019005

Epigenética en el carcinoma hepatocelular

 Figura 1: Generación de operadores booleanos por parte de Gemini. Autoría propia.

Las alteraciones epigenéticas en el carcinoma hepatocelular (HCC) han sido remodelación de la cromatina, modificaciones en las histonas, metilación del ADN y la expresión de ARN no codificante. Estos procesos epigenéticos corresponden con la progresión y la metástasis del HCC. Los análisis actuales señalan que genes como: CEBPβ, CCL20, ESM1, PGK1, PDHK1, tienen cambios en su metilación y la fosforilación en los promotores. Por lo tanto, estos resultados nos permiten concluir que estos cambios afectan la expresión de diferentes genes y procesos de angiogénesis y activación de vías metabólicas que son vitales para el HCC (1).

Figura 2: Una vista breve de las modificaciones epigenéticas en el carcinoma hepatocelular (HCC). El ADN envuelto alrededor de la histona tiene colas (acetilación) que cambian la compactación del nucleosoma y regulan la accesibilidad de la cromatina. La metilación de CpG encontrada en elementos reguladores aguas arriba (promotores, potenciadores y sitios de unión de factores de transcripción) del ADN, suprime la actividad y expresión de genes supresores de tumores en el HCC. Las modificaciones de histonas incluyen la acetilación y la metilación de histonas catalizadas por enzimas como las histonas acetil transferasas (HATs), histonas desacetilasas (HDACs) y metil transferasas de histonas (HMT). La metilación del ADN incluye la metilación en sitios CpG catalizada por las ADN metil transferasas (DNMT1, DNMT3A y DNMT3B). Las HATs regulan positivamente hMOF/KAT8; las HDACs regulan positivamente HIF-1α, VEGF y regulan negativamente p53; las HMTs regulan positivamente SUV39H, SETDB1 y KMT1C y regulan negativamente la expresión de p53. Las DNMTs hipometilan genes promotores de tumores y regulan positivamente la expresión de CCL20, CEBPβ, ESM1 e hipermetilan los TSGs y regulan negativamente APC, CDH1, NOTCH3, CDKN2A y regulan positivamente DCC y CSPG2. De este modo, se activa la iniciación, progresión, metástasis y angiogénesis del HCC. Recuperado de: https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2021.07.017

Referencia bibliográfica:  

1. Nagaraju GP, Dariya B, Kasa P, Peela S, El-Rayes BF. Epigenetics in hepatocellular carcinoma. Semin Cancer Biol [Internet]. 2022;[citado el 08 de junio de 2024]86:622–32. Disponible en:http://dx.doi.org/10.1016/j.semcancer.2021.07.017